期刊简介
本刊系湖南中医药大学主办，1979年创刊，现已成为具有较大影响的国内外公开发行的中医药学术刊物，本刊注重中医药学术水平，主要报道本院和国内外最新教学、医疗科研成果和学术成就，其学术质量上乘，版式编排规范，印刷装帧美观大方，连续数年被国家科委信息所收录为统计源期刊，全国10家具有影响的文摘杂志收录，在2004、2006、2008年连续三次获得中国高校优秀科技期刊奖，标志着我刊的学术水平已得到国际期刊界的承认。
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首页>湖南中医药大学学报杂志
- 杂志名称：湖南中医药大学学报杂志
- 主管单位：湖南省教育厅
- 主办单位：湖南中医药大学
- 国际刊号：1674-070X
- 国内刊号：43-1472/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：曾2次获国家教育部高校科技期刊优秀学报二等奖（2005、1999）期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CA 化学文摘(美), 维普收录(中)
大鼠UT-B重组腺病毒载体的构建及体外转染Caco-2细胞后基因表达
张征；刘怡晟；蒋更如；陈凉；潘曙明
关键词：尿素转运蛋白B, 腺病毒载体, Caco-2细胞, 大鼠
摘要：目的 采用Gateway TM技术构建含大鼠尿素转运蛋白B(Urea transporter B,UT-B)和增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的重组腺病毒载体,并以该载体体外转染Caco-2细胞,观察Caco-2细胞内UT-B的表达.方法分别以pMD18-UT-B和IRES2-EGFP质粒为模板,PCR扩增UT-B和IRES-EGFP序列,通过引物重叠区进行PCR拼接,并在UT-B-IRES-EGFP两端引入attB1、attB2重组臂序列.PCR产物经BP重组系统将UT-B-IRES-EGFP融合基因重组到入门载体pDONR221中,构建入门克隆.入门克隆与表达载体pAD/CMV/V5-DEST使用LR重组系统进行体外重组,构建表达克隆pAD-UT-B-IRES-EGFP,pAD-UT-B-IRES-EGFP转化DH-5α,筛选阳性克隆,PCR及测序验证.pAD-UT-BIRES-EGFP用Pac I酶切线性化后由Lipofectamine 2000介导转染293A细胞,包装病毒,收集病毒液并测定滴度.重组的腺病毒体外感染培养的Caco-2细胞,RT-PCR观察Caco-2细胞中UT-B mRNA的表达.结果成功构建了pAD-UT-B-IRES-EGFP载体,经PCR及测序验证,表达载体包含UT-B基因,且序列与GeneBank中收录的大鼠UT-B序列一致.重组的腺病毒感染Caco-2细胞后可检测到UT-B mRNA的表达.结论利用GatewayTM系统成功构建了包含UT-B和IRES-EGFP的腺病毒表达载体,为进一步研究其功能奠定了基础.
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